
聚乙稀亚胺也就是PEI,它当作非病毒载体转染试剂,由于成本低、适用范围宽泛等特性,已经变成分子生物学实验室常用的选择,可是市场上不一样品牌、不一样规格型号的PEI试剂差别比较大,怎样科学筛选就变成了实验取得成功的关键要素之一,根据很多实验室数据,包括对HEK293、CHO等常见细胞系转染效率的统计分析,总结出以下关键点:
1.纯度指标:直接影响转染效率与细胞毒性
高纯度的聚醚酰亚胺(一般要求内毒素含量低于1EU/mg)能让转染效率提高30%到50%。研究发现,如果聚醚酰亚胺中游离的聚乙烯亚胺单体含量超出5%,HEK293细胞的生存概率就会降到70%以下,提议优先选用具备高效液相色谱纯度分析报告的产品。
2.品牌验证:选择经过文献引用的供应商
权威刊物统计显示,Sigma-Aldrich的线性PEI在哺乳动物细胞转染里的被引率属最高,其在不一样细胞系中的转染效能稳定处在60%到85%中间,新兴的国产品牌比如碧云天、翊圣生物、中科百抗的某些型号也被多篇SCI论文所证实。提议经过PubMed搜索目标细胞系与PEI品牌组合的文献支撑率。
3.规格适配:根据实验规模优化成本
展开剩余48%以常规6孔板转染为例,1mg PEI可进行约200次转染。实验室数据显示:
-<50次转染:建议选择100mg包装
50-500次转染:500mg包装性价比最高
->500次转染:1g大包装可降低30%成本
4.稳定性保障:运输储存条件必须达标
PEI在4℃保存6个月,活性大概下降15%;而在-20℃冻存24个月,还能保持90%以上活性,建议选择提供干冰运输且带有温度监测标签的供应商,与此同时要确认试剂瓶是避光包装的(因为紫外线会致使PEI降解)。
5.细胞特异性:特殊细胞系需定制化方案
碰到难以转染的细胞比如原代细胞、神经元这类就得格外留意试剂的选择:
-悬浮细胞:建议选择分子量25kDa的支化PEI(转染效率比线性PEI高40%)
-贴壁细胞:40-70kDa线性PEI效果更佳
干细胞:推荐使用低毒性PEI衍生物
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